DE3432143A1 - METHOD FOR ENCLOSURE A MATERIAL TO BE ENCLOSED - Google Patents
METHOD FOR ENCLOSURE A MATERIAL TO BE ENCLOSEDInfo
- Publication number
- DE3432143A1 DE3432143A1 DE19843432143 DE3432143A DE3432143A1 DE 3432143 A1 DE3432143 A1 DE 3432143A1 DE 19843432143 DE19843432143 DE 19843432143 DE 3432143 A DE3432143 A DE 3432143A DE 3432143 A1 DE3432143 A1 DE 3432143A1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- polymer
- capsule
- cells
- solution
- anions
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
- A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
- A61K9/1629—Organic macromolecular compounds
- A61K9/1652—Polysaccharides, e.g. alginate, cellulose derivatives; Cyclodextrin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
- A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
- A61K9/5005—Wall or coating material
- A61K9/5021—Organic macromolecular compounds
- A61K9/5031—Organic macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyethylene glycol, poly(lactide-co-glycolide)
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J13/00—Colloid chemistry, e.g. the production of colloidal materials or their solutions, not otherwise provided for; Making microcapsules or microballoons
- B01J13/02—Making microcapsules or microballoons
- B01J13/06—Making microcapsules or microballoons by phase separation
- B01J13/08—Simple coacervation, i.e. addition of highly hydrophilic material
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J13/00—Colloid chemistry, e.g. the production of colloidal materials or their solutions, not otherwise provided for; Making microcapsules or microballoons
- B01J13/02—Making microcapsules or microballoons
- B01J13/20—After-treatment of capsule walls, e.g. hardening
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/04—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier entrapped within the carrier, e.g. gel or hollow fibres
Description
3432H33432H3
Damon Biotech, Inc. Needham Heights, MA o2 194, V. St. A,Damon Biotech, Inc. Needham Heights, MA o2 194, V. St. A,
Verfahren zur Einkapselung eines einzuhüllendenMethod of encapsulating an encased
MaterialsMaterials
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Einkapselung eines einzuhüllenden Materials in einer semipernveablen Membran, insbesondere ein Verfahren zur Einkapselung in einer Mikrokapsel eines Materials, einschließlich Lebendzellen, das gegenüber dem pH-Wert, der Temperatur oder der Ionenkonzentration empfindlich ist. Das erfindungsgemäße Verfahren zur Einkapselung ermöglicht die Bildung einer semipermeablen Membran ohne Schaden für das einzuhüllende Material. Die Erfindung betrifft auch eine Kapsel, bei der eine Innenschicht aus einem aminierten Polymer an eine Außenschicht aus einem anionischen Polymer ionisch gebunden ist.The invention relates to a method for encapsulating a material to be enveloped in a semipernvable Membrane, in particular a method for encapsulation in a microcapsule of a material, including live cells that are sensitive to pH, temperature or ion concentration is. The encapsulation method according to the invention enables the formation of a semipermeable membrane without damage to the material to be wrapped. The invention also relates to a capsule in which an inner layer made of an aminated polymer ionically bonded to an outer layer made of an anionic polymer is.
Obwohl eine Vielzahl von Verfahren zur Mikroeinkapselung von einzuhüllendem Material entwickelt worden sind, können die meisten dieser Verfahren wegen der dafür notwendigen scharfen Bedingungen nicht zur Einkapselung von Material, wie Lebendzellen, verwen-Although a variety of methods for microencapsulating material to be encapsulated have been developed most of these procedures cannot be performed because of the harsh conditions required for them Encapsulation of material such as living cells
0192-DBH-419-K1-E0192-DBH-419-K1-E
det werden, das gegenüber dem pH-Wert, der Temperatur oder der Ionenkonzentration empfindlich ist. In der US-PS 4 352 883 ist das vermutlich erste Verfahren zur erfolgreichen Einkapselung von Lebendgewebe oder -zellen in einer semipermeablen Membran beschrieben. Dabei wird um das Gewebe oder die Zellen eine Zwischenkapsel aus einem gelierbaren Material, vorzugsweise aus einem anionischen Gummi, wie Natriumalginat, gebildet; durch Vernetzen der Oberflächenschichten der Zwischenkapsel wird eine dauerhafte, semipermeable Membran hergestellt. Typischerweise wird ein Gemisch des Gummis und des einzuhüllenden Materials zur Herstellung einer Zwischenkapsel mit einer Gelierlösung, vorzugsweise einer Calciumionenlösung, behandelt. Die entstandene Zwischenkapsel wird zur Herstellung einer dauerhaften Membran mit einer Lösung eines polykationischen Materials umgesetzt. Das Innere der Kapsel kann wieder verflüssigt werden, und zwar durch Wiederherstellen von Bedingungen, unter denen der anionische Gummi flüssig ist, z. B. durch Verändern der Ionenkonzentration bei Einbringen der Kapseln in eine phosphatgepufferte Salzlösung. Die Wiederverflüssigung des Kapselinneren erleichtert den Nährstofftransport durch die Membran und fördert das Zellwachstum. Da die Bedingungen für die Einkapselung, wie Temperatur, Ionenstärke oder pH-Bereich, nicht unbedingt scharf sein müssen, ist auch eine Schädigung des einzuhüllenden Materials oder eine Beeinträchtigung der Lebensfähigkeit der Zellen nicht unbedingt notwendig. that is sensitive to pH, temperature or ion concentration. In the U.S. Patent 4,352,883 is believed to be the first method of successfully encapsulating living tissue or described cells in a semipermeable membrane. An intermediate capsule is created around the tissue or cells formed from a gellable material, preferably an anionic gum such as sodium alginate; a permanent, semipermeable membrane is produced by crosslinking the surface layers of the intermediate capsule. Typically, a mixture of the rubber and the material to be wrapped is used to make a Intermediate capsule treated with a gelling solution, preferably a calcium ion solution. The resulting intermediate capsule is used to manufacture a permanent membrane with a solution of a polycationic material implemented. The interior of the capsule can be re-liquefied by restoring conditions among which the anionic gum is liquid, e.g. B. by changing the ion concentration upon introduction of the capsules in a phosphate buffered saline solution. The reliquefaction of the interior of the capsule facilitates the transport of nutrients through the membrane and promotes cell growth. Since the conditions for encapsulation, such as temperature, ionic strength or pH range, do not necessarily have to be sharp, is also damage of the material to be enveloped or impairment of the viability of the cells is not absolutely necessary.
Aufgabe der Erfindung war es somit, ein Verfahren zur Einkapselung von Lebendzellen oder anderem empfind-The object of the invention was therefore to provide a method for encapsulating living cells or other sensitive
lichen Material in semipermeable Membranen zur Verfügung zu stellen. Auch sollte einzuhüllendes Material, das wegen seiner Empfindlichkeit gegenüber dem pH-Wert, der Ionenkonzentration oder -ladung oder der Temperatur in bekannten Verfahren schwer einzukapseln ist, im erfindungsgemäßen Verfahren eingekapselt werden. Eine weitere Aufgabe der Erfindung war es, eine verbesserte Kapsel mit einer semipermeablen Membran zur Verfügung zu stellen. available in semipermeable membranes to deliver. Also should be encased material because of its sensitivity to pH, the Ion concentration or charge or the temperature is difficult to encapsulate in known processes, in the invention Procedure to be encapsulated. Another object of the invention was to provide an improved capsule to provide with a semipermeable membrane.
Diese Aufgaben werden erfindungsgemäß gelöst.These objects are achieved according to the invention.
Gegenstand der Erfindung ist somit ein Verfahren zur Einkapselung eines einzuhüllenden Materials in einer semipermeablen Membran, das dadurch gekennzeichnet ist, daßThe invention therefore relates to a method for encapsulating a material to be enveloped in a semipermeable membrane, which is characterized in that
A. das einzuhüllende Material in einem wäßrigen Medium, in dem ein Kationen enthaltendes Polysaccharid gelöst ist, suspendiert wird,A. the material to be enveloped in an aqueous medium in which a polysaccharide containing cations is dissolved, is suspended,
B. die Suspension zu das einzuhüllende Material enthaltende Tröpfchen geformt wird,B. the suspension is formed into droplets containing the material to be enveloped,
C. die Tröpfchen mit einer Anionen enthaltenden Lösung behandelt werden, wobei sie zu diskreten, formbeständigen Zwischenmatrizes gelieren, undC. The droplets are treated with a solution containing anions, whereby they become discrete, dimensionally stable Gel intermediate matrices, and
D. die Zwischenmatrizes mit einem Polymer, das mit den Kationen reagierende Anionen enthält, behandelt werden, wobei die Oberflächenschichten der Zwischenmatrizes zu Kapseln um die Tröpfchen vernetzt werden.D. the intermediate matrices are treated with a polymer containing anions that react with the cations, wherein the surface layers of the intermediate matrices are crosslinked into capsules around the droplets.
3A32U33A32U3
In erfindungsgemäßen Verfahren kann einzuhüllendes Material, wie Enzyme, Antikörper, Hormone oder Lebendzellen, z. B. Gewebekulturen oder genetisch modifizierte Zellen, in einer semipermeablen Membran eingekapselt werden. Das einzuhüllende Material wird in einem wäßrigen Medium suspendiert, indem ein Kationen enthaltendes Polysaccharid gelöst ist, vorzugsweise ein aminiertes Polysaccharid, wie ein Poly-D-Glucosamin (Chitosan). Die Tröpfchen der Suspension gelieren, wenn man sie mit einer Lösung eines zwei- oder mehrwertigen Anions behandelt, z. B. mit Phosphat-, Hydrogenphosphat-oder Sulfatsalzen. Eine dauerhafte Membran entsteht durch Vernetzen der Oberflächenschichten der Zwischenmatrix mit einem Polymer, das Anionen und vorzugsweise Carboxylgruppen enthält, die mit den Kationen der Matrix reagieren. Poly-L-Glutaminsäure und Poly-L-Asparaginsäure sind entweder als solche oder in Form ihrer Salze bevorzugte anionische Polymere. Das Innere der Kapsel kann durch Behandlung der Kapsel mit einer Lösung eines niedrig molekularen Polykations, z. B. Spermadin, Spermin oder Harnstoff, wieder löslich gemacht werden. Die Wiederverflüssigung des Kapselinneren fördert den Massentransport zwischen der extrakapsulären Flüssigkeit und dem intrakapsulären Raum.In the method according to the invention, material to be enveloped, such as enzymes, antibodies, hormones or living cells, z. B. tissue cultures or genetically modified cells, encapsulated in a semipermeable membrane will. The material to be enveloped is suspended in an aqueous medium by containing a cation Polysaccharide is dissolved, preferably an aminated polysaccharide, such as a poly-D-glucosamine (chitosan). The droplets of the suspension gel when treated with a solution of a divalent or polyvalent anion, z. B. with phosphate, hydrogen phosphate or sulfate salts. A permanent membrane is created by networking the Surface layers of the intermediate matrix with a polymer that contains anions and preferably carboxyl groups, the react with the cations of the matrix. Poly-L-glutamic acid and poly-L-aspartic acid, either as such or in the form of its salts, are preferred anionic polymers. The inside of the capsule can be cleaned by treating the capsule with a solution of a low molecular weight polycation, z. B. spermadine, spermine or urea, can be made soluble again. The reliquefaction of the interior of the capsule promotes mass transport between the extracapsular fluid and the intracapsular space.
Im erfindungsgemäßen Verfahren kann man Lebendzellen in einer semipermeablen Membran einkapseln. Die Zellen werden in einem wäßrigen Medium, das die Lebensfähigkeit der Zelle nicht beeinträchtigt und ein aminiertes Glucopolysaccharid enthält, suspendiert. Die Tröpfchen der Suspension werden mit einer Gelierlösung behandelt, wobei eine formbeständige, wasserunlösliche Zwischenmatrix entsteht. Die Gelierlösung ist eine wäßrige Lö-Live cells can be used in the method according to the invention encapsulate in a semi-permeable membrane. The cells are placed in an aqueous medium that increases viability of the cell is not affected and contains an aminated glucopolysaccharide. The droplets the suspension are treated with a gelling solution, creating a dimensionally stable, water-insoluble intermediate matrix arises. The gelling solution is an aqueous solution
sung eines zwei- oder mehrwertigen Anions, z. B. eine Lösung von Phosphat-, Hydrogenphosphat- oder Sulfatsalzen. Die Kapsel wird dann mit einem Polymer, das eine Vielzahl von Carboxylgruppen enthält, z. B. Polyglutaminsäure oder Polyasparaginsäure,behandelt, wodurch die Oberflächenschichten der Zwischenmatrix dauerhaft vernetzt werden. Das Kapselinnere wird in einer praktisch fällungsfreien Reaktion wieder verflüssigt, wenn man die Kapsel einer Lösung eines niedrigmolekularen Polykations, beispielsweise Spermadin, Spermin oder Harnstoff, aussetzt. Die Wiederverflüssigung erfolgt durch die Entfernung der mehrwertigen Anionen aus dem inneren Gel. Human- oder Tiergewebezellen aus einem Gewebewachstumsmedium und genetisch modifizierte,prokariotische oder eukariotische Zellen in einem Wachstumsmedium können im erfindungsgemäßen Verfahren eingekapselt werden. Das erfindungsgemäße Verfahren zur Einkapselung ist so schonend, daß die eingekapselten Zellen nicht beschädigt werden; die normalen metabolischen Prozesse, einschließlich Wachstum und Reproduktion, laufen innerhalb der Kapsel weiter ab.solution of a divalent or polyvalent anion, e.g. B. a solution of phosphate, hydrogen phosphate or sulfate salts. The capsule is then coated with a polymer containing a variety of carboxyl groups, e.g. B. polyglutamic acid or polyaspartic acid, treated, whereby the surface layers the intermediate matrix are permanently networked. The interior of the capsule is practically free of precipitation Reaction liquefied again if you put the capsule in a solution of a low molecular weight polycation, for example Exposing spermadin, spermine or urea. Reliquefaction takes place by removing the polyvalent anions from the inner gel. Human or animal tissue cells from a tissue growth medium and genetically modified, procaryotic or eukaryotic Cells in a growth medium can in the invention Procedure to be encapsulated. The inventive method for encapsulation is so gentle that the encapsulated Cells are not damaged; the normal metabolic processes, including growth and reproduction, continue within the capsule.
Die Erfindung betrifft ferner eine Kapsel, bei der eine Membran einen geschlossenen intrakapsulären Raum umgibt. Die Membran hat eine Innenschicht aus einem polyaminierten Polymer und vorzugsweise einem aminierten Polysaccharid, insbesondere einem aminierten Glucopolysaccharid, die ionisch an eine Außenschicht aus einem polyanionischen Polymer und vorzugsweise einem polycarboxylierten Polymer, wie Polyglutamin- oder Polyasparaginsäure, zu einer wasserunlöslichen dauerhaften Kapsel vernetzt ist. In den intrakapsulären Raum kann man eineThe invention also relates to a capsule in which a membrane forms a closed intracapsular space surrounds. The membrane has an inner layer made of a polyaminated polymer and preferably an aminated one Polysaccharide, especially an aminated glucopolysaccharide, ionically attached to an outer layer made of a polyanionic polymer and preferably a polycarboxylated one Polymer, such as polyglutamic or polyaspartic acid, into a water-insoluble permanent capsule is networked. One can get into the intracapsular space
Zelle, vorzugsweise eine eukariotische, bakterielle oder genetisch modifizierte Zelle einbetten; in diesem Fall sollten die polyanionischen und polyaminierten Polymere mit der Zelle physiologisch verträglich sein.Embed cell, preferably a eukaryotic, bacterial or genetically modified cell; in this case the polyanionic and polyaminated polymers should be physiologically compatible with the cell.
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Einkapselung eines einzuhüllenden Materials, wie eukariotische oder prokariotische, natürlich vorkommende oder genetisch modifizierte Lebendzellen oder Gewebekulturen in einer semipermeablen Membran. Die Erfindung betrifft auch eine neue Mehrschichtenkapsel.The invention relates to a method of encapsulating a material to be enveloped, such as eukaryotic or prokaryotic, naturally occurring or genetically modified live cells or tissue cultures in a semipermeable membrane. The invention also relates to a new multilayer capsule.
Durch Reaktion eines Kationen enthaltenden PoIysaccharids oder Glucopolysaccharids mit einem mehrwertigen Anion entsteht eine Gel- oder Zwischenmatrix um das einzuhüllende Material oder die lebende Zelle. Die Oberflächenschichten der entstandenen Zwischenmatrix werden mit einem Polymer, das Anionen und vorzugsweise Carboxylgruppen enthält, zu einer dauerhaften, das einzuhüllende Material einkapselnde Membran ionisch vernetzt. Das Innere der Kapsel kann durch Behandeln der Kapsel mit einer Lösung eines niedrigmolekularen Polykations wieder verflüssigt werden.By reaction of a polysaccharide containing cations or glucopolysaccharide with a polyvalent anion creates a gel or intermediate matrix the material to be enveloped or the living cell. The surface layers of the resulting intermediate matrix are with a polymer that contains anions and preferably carboxyl groups, into a permanent one to be enveloped Material encapsulating membrane ionically cross-linked. The inside of the capsule can be made by treating the capsule with be liquefied again with a solution of a low molecular weight polycation.
Das einzuhüllende Material, z. B. Enzyme, Hormone, Antikörper oder Lebendzellen, wird in einem wäßrigen Medium suspendiert, das ein gelierbares, Kationen enthaltendes Polymer enthält. Ein bevorzugtes gelierbares Polymer ist ein aminiertes Glucopolysaccharid, insbesondere Chitosan (Poly-D-Glucosamin). Chitosan entsteht durch Säurehydrolyse von Chitin (Poly-D-N-Acetylglucosamin), das die erste Aufbausubstanz der wirbellosen Außenskelette ist. Chitosan ist ein langkettiges, aminiertesThe material to be wrapped, e.g. B. enzymes, hormones, antibodies or live cells is in an aqueous Suspended medium which contains a gellable, cation-containing polymer. A preferred gellable Polymer is an aminated glucopolysaccharide, especially chitosan (poly-D-glucosamine). Chitosan is created by acid hydrolysis of chitin (poly-D-N-acetylglucosamine), which is the first structural substance of the invertebrate exoskeleton. Chitosan is a long-chain, aminated
Polymer, das mit den meisten Zellen physiologisch verträglich ist. Es ist in Wasser nur schwach löslich, es kann jedoch in verdünnter Essigsäure leicht gelöst werden. Polymer that is physiologically compatible with most cells. It is only slightly soluble in water, it however, it can easily be dissolved in dilute acetic acid.
Chitosan-Vorratslösungen werden durch Lösen des Chitosans in 0,5 M (Mol/l) Essigsäure hergestellt. Die Essigsäure wird durch wiederholte Dialyse gegen phosphatgepufferte Salzlösung (PBS) aus der Lösung entfernt. Das Chitosan fällt aus dieser Lösung nicht aus, wenn sie unter 37 0C aufbewahrt wird. Die bevorzugte Vorratslösung, 1,4 % Chitosan in PBS, wurde erfolgreich längere Zeit bei 4 0C aufbewahrt.Chitosan stock solutions are made by dissolving the chitosan in 0.5 M (mol / l) acetic acid. The acetic acid is removed from the solution by repeated dialysis against phosphate buffered saline (PBS). The chitosan does not precipitate from this solution, if kept below 37 0 C. The preferred stock solution, 1.4 % chitosan in PBS, was successfully stored at 4 ° C. for a longer period of time.
Das wie oben beschrieben hergestellte Chitosan wird mit dem einzuhüllenden Material vermischt, wobei eine Lösung oder eine Aufschlämmung entsteht, die dann in Tröpfchen oder andere Formen geformt wird. Obwohl Lösungen mit einer Endkonzentration an Chitosan von 0,4 % (Gewicht/Volumen) gelieren, liegt das Optimum des Gelierens bei 0,8 bis 1,2 I (Gewicht/Volumen) Chitosan in isotoner, 125 mM Na-HPO.-Lösung. Die Suspension von Chitosan und einzuhüllendem Material kann mit jeder herkömmlichen tröpfchenbildenden Vorrichtung zu Tröpfchen geformt werden. Eine solche tröpfchenbildende Vorrichtung wird im folgenden erläutert.The chitosan prepared as described above is mixed with the material to be enveloped, forming a solution or a slurry which is then formed into droplets or other shapes. Although solutions with a final concentration of chitosan of 0.4 % (weight / volume) gel, the optimum gelation is between 0.8 and 1.2 l (weight / volume) chitosan in isotonic, 125 mM Na-HPO. Solution . The suspension of chitosan and enveloping material can be formed into droplets using any conventional droplet-forming device. Such a droplet-forming device is explained below.
Ein die Suspension enthaltendes Rohr ist mit einem Verschluß ausgerüstet, an dem die tröpfchenbildende Vorrichtung angebracht ist. Die Vorrichtung besteht aus einem Gehäuse, das eine Lufteinblasdüse oben und einen länglichen Reibungshohlkörper, der in den Verschluß einge-A tube containing the suspension is equipped with a closure on which the droplet-forming device is appropriate. The device consists of a housing that has an air injection nozzle on top and a elongated frictional hollow body, which is inserted into the closure
paßt ist, aufweist. Eine 10-ml-Spritze, die mit einer Schrittpumpe verbunden ist und eine Nadel aufweist, die über die Länge des Gehäuses reicht, beispielsweise eine Teflon-beschichtete Nadel mit einem inneren Durchmesser von 25 mm, wird oben am Gehäuse angebracht. Das Innere des Gehäuses ist so ausgelegt, daß die Spitze der Nadel einem ständigen laminaren Luftstrom ausgesetzt ist, der als Luftmesser wirkt. Beim Betrieb drückt die Schrittpumpe Tröpfchen der Lösung von der Nadelspitze. Jeder Tropfen wird durch den Luftstrom "abgeschnitten" und fällt etwa 2,5 cm in die Gelierlösung, vorzugsweise eine Dinatrium-hydrogenphosphatlösung, wo er durch Reaktion mit den negativen Ionen sofort geliert. Der Abstand zwischen der Nadelspitze und der Oberfläche der Gelierlösung ist vorzugsweise groß genug, um der Suspension von Chitosan und einzuhüllendem Material die physikalisch günstigste Form zu verleihen, d. h. eine Kugelform (maximales Volumen bei einer minimalen Oberfläche). Die Luft aus dem Rohr strömt durch eine öffnung in den Verschluß. Dieses Verfahren gewährt ein "Vernetzen" des Gels und die Bildung einer hochviskosen, formbeständigen schützenden Zwischenmatrix, die das suspendierte, einzuhüllende Material und sein Medium enthält. Die Zwischenmatrizes sammeln sich in der Lösung als getrennte Phase und können durch Absaugen abgetrennt werden.fits, has. A 10 ml syringe that comes with a Step pump is connected and has a needle that extends the length of the housing, for example a Teflon-coated needle with an inner diameter of 25 mm is attached to the top of the housing. The interior of the housing is designed so that the tip of the needle is exposed to a constant stream of laminar air that acts as an air knife. In operation, the step pump pushes droplets of solution from the tip of the needle. Each drop is "cut off" by the air stream and falls approximately 2.5 cm into the gelling solution, preferably a disodium hydrogen phosphate solution, where it immediately gels through reaction with the negative ions. Of the The distance between the needle tip and the surface of the gelling solution is preferably large enough to allow the suspension to give the physically most favorable shape of chitosan and the material to be enveloped, d. H. one Spherical shape (maximum volume with a minimum surface). The air from the pipe flows through an opening in the lock. This process ensures "crosslinking" of the gel and the formation of a highly viscous, dimensionally stable, protective intermediate matrix that contains the suspended material to be enveloped and its medium contains. The intermediate matrices collect in the solution as a separate phase and can be removed by suction be separated.
Als mehrwertige Gelierlösung ist eine 125 mM Na^ Lösung bevorzugt; jedoch geben auch einbasische Natriumphosphat- und Natriumsulfatlösungen annehmbare Zwischenmatrizes. Auch Natriumeitrat geliert die Suspension; die besten Ergebnisse werden jedoch mit ein- oder zweibasi-As a polyvalent gelling solution, a 125 mM Na ^ Solution preferred; however, sodium phosphate and sodium sulfate monobasic solutions also give acceptable intermediate matrices. Sodium citrate also gels the suspension; however, the best results are achieved with one- or two-base
sehen Phosphat- und Sulfatlösungen erhalten. Ist die Anionenkonzentration zu niedrig (beispielsweise unter etwa 100 mM), so geliert die Suspension nicht.see phosphate and sulfate solutions obtained. Is the The anion concentration is too low (for example below about 100 mM), the suspension will not gel.
Die im erfindungsgemäßen Verfahren hergestellten Zwischenmatrizes werden gesammelt und zur Entfernung der überschüssigen Gelierlösung gewaschen. Die Matrizes werden dann mit einer Überzugs- oder Vernetzungslösung eines polyanionischen und vorzugsweise polycarboxylierten Polymers behandelt. Eine bevorzugte Vernetzungslösung ist eine 1 %-ige Poly-L-Asparaginsäure- oder PoIy-L-Glutaminsäurelösung, die im Verhältnis 1 : 15 mit 150 mM Natriumchlorid zu einer Polymerendkonzentration von 6,6 χ 10~ g/100 ml verdünnt ist. Das Molekulargewicht der Poly-L-Asparagin- oder Poly-L-Glutaminsäure liegt im Bereich von 3000 bis 100.000 Dalton oder darüber, wobei der Bereich von 25.000 bis 60.000 Dalton bevorzugt ist. Eine Reaktionszeit von 3 bis 6 min bei Raumtemperatur ist zufriedenstellend.The intermediate matrices produced in the process of the invention are collected and used for removal washed the excess gelling solution. The matrices are then coated with a coating or crosslinking solution of a polyanionic and preferably polycarboxylated polymer. A preferred crosslinking solution is a 1% poly-L-aspartic acid or poly-L-glutamic acid solution, those in a ratio of 1:15 with 150 mM sodium chloride to a final polymer concentration is diluted from 6.6 χ 10 ~ g / 100 ml. The molecular weight of the poly-L-aspartic or poly-L-glutamic acid is in the range of 3,000 to 100,000 Daltons or greater, with the range of 25,000 to 60,000 Daltons being preferred is. A reaction time of 3 to 6 minutes at room temperature is satisfactory.
Die Erfindung wird durch die folgenden Beispiele erläutert.The invention is illustrated by the following examples.
Eine wie oben angegeben hergestellte Vorratslösung von 1,4 % Chitosan (CSN-Sigma Chemical Co.) in 14 bis 17 mM (mMol/1) isotoner phosphatgepufferter Salzlösung (PBS) wurde zur Bestimmung der optimalen CSN-Konzentration für die Bildung der Zwischenmatrix verwendet, wobei verschiedene Chitosan-Konzentrationen untersucht wurden. Der CSN-Vorratslösung wurden 1-ml-Proben entnommen und mit Kalbsfötusserum (FCS-Flow Laboratories)A stock solution of 1.4 % chitosan (CSN-Sigma Chemical Co.) in 14 to 17 mM (mmol / l) isotonic phosphate buffered saline (PBS), prepared as indicated above, was used to determine the optimal CSN concentration for the formation of the intermediate matrix , whereby different chitosan concentrations were investigated. 1 ml samples were taken from the CSN stock solution and mixed with fetal calf serum (FCS-Flow Laboratories)
versetzt. Die Tröpfchen wurden gebildet und in die unten beschriebenen Lösungen unter Verwendung einer wie oben beschriebenen tröpfchenbildenden Vorrichtung eingebracht. In Tabelle 1 sind drei verschiedene Chitosan-Konzentrationen angegeben, nämlich 0,6, 0,8 und 1 % (Gewicht/Volumen).offset. The droplets were formed and incorporated into the solutions described below using a droplet forming device as described above. Table 1 shows three different chitosan concentrations, namely 0.6, 0.8 and 1 % (weight / volume).
Probesample
CSN-Konzentration (Gew./Vol.)CSN concentration (w / v)
0,8 I 0,6 % 1,0 i 0.8 I 0.6 % 1.0 i
Es wurden zwei Gelierpuffer hergestellt, nämlich 110 mM Natriumeitrat (Sigma) und 125 mM Dinatriumhydrogenphosphat (Sigma). In allen Proben waren die mit diesen Pufferlösungen gebildeten Zwischenmatrizes annehmbar, mit dem Natriumeitratpuffer war jedoch das Gelieren der Probe 1 mangelhaft. Während mit allen Proben annehmbare Zwischenmatrizes im Dinatrium-hydrogenphosphatpuffer gebildet wurden, gab Probe 3 die beste Gelierung.Two gelling buffers were prepared, namely 110 mM sodium citrate (Sigma) and 125 mM disodium hydrogen phosphate (Sigma). In all samples were the intermediate matrices formed with these buffer solutions acceptable, but with the sodium citrate buffer it was Gelling of sample 1 is poor. While with all samples acceptable intermediate matrices in disodium hydrogen phosphate buffer Sample 3 gave the best gelation.
Eine 1 l-ige Lösung von Poly-L-Asparaginsäure (Molekulargewicht: 40.000 Dalton; Sigma) wurde im Verhältnis 1:15 mit 150 mM Natriumchlorid (Sigma) zu einer Konzentration von 6,6 χ 10~ g/100 ml Lösung verdünnt. Die mit der Probe 3 gebildeten Zwischenmatrizes wurden aus dem Gelierpuffer entfernt, wiederholt mit isotoner PBSA 1 liter solution of poly-L-aspartic acid (molecular weight: 40,000 daltons; Sigma) was 1:15 with 150 mM sodium chloride (Sigma) to a concentration diluted from 6.6 χ 10 ~ g / 100 ml of solution. The intermediate matrices formed with Sample 3 were made from removed from the gelling buffer, repeated with isotonic PBS
3432H33432H3
gewaschen und in der Poly-L-Asparaginsäurelösung wieder suspendiert. Nach einer Reaktionszeit von 6 min bei Raumtemperatur in der Poly-L-Asparaginsäurelösung war die Vernetzung vollständig, es waren dauerhafte Membranen entstanden. Die Kapseln waren im wesentlichen kugelförmig mit einem Durchmesser von etwa 380 bis 480 μπι. Einige Kapseln hatten kleine Schwänze. Die auf diese Weise hergestellten Kapseln waren nicht klebrig und hatten keine Neigung zum Verklumpen. Die Porosität der Kapseln wurde empirisch auf etwa 80.000 Dalton bestimmt. Das Beispiel zeigt, daß im erfindungsgemäßen Verfahren annehmbare Kapseln gebildet, werden können.washed and put in the poly-L-aspartic acid solution again suspended. After a reaction time of 6 min at room temperature in the poly-L-aspartic acid solution the cross-linking completely, permanent membranes were created. The capsules were essentially spherical in shape with a diameter of about 380 to 480 μm. Some capsules had small tails. The capsules made in this way were not sticky and had no tendency to clump. The porosity of the capsules has been empirically determined to be about 80,000 Daltons. The example shows that in the method according to the invention acceptable capsules can be formed.
Es sollte gezeigt werden, daß die Lebensfähigkeit von Zellen durch die Einkapselung nicht beeinträchtigt wird. Die in diesem Versuch verwendete Zellkultur war eine Friend-Erythroleukämie-Zellinie CFEL745), d. h. eine Maus-Erythroleukämie-Zellinie, die in einer Suspensionskultur schnell wächst.It should be shown that encapsulation does not affect cell viability. The cell culture used in this experiment was a Friend erythroleukemia cell line CFEL 745 ), ie a mouse erythroleukemia cell line which grows rapidly in a suspension culture.
Eine Kultur von FELy.r-Zellen wurde 5 min zentrifugiert; der entstandene Kuchen wurde in Kalbsfötusserum (Flow Labs) als Aufschlämmung wieder suspendiert. Eine wie oben beschriebene Vorratslösung von 1,4 % Chitosan wurde hergestellt und mit der Zellkulturlösung vermischt, wobei die Endkonzentration an Chitosan 1 % (Gewicht/Volumen) und an Zellen etwa 5x10 Zellen/ml betrug. Es wurden Zwischenmatrizes hergestellt, indem das Chitosan-Zellengemisch durch eine tröpfchenbildende Vorrichtung (wie oben beschrieben) gedrückt wurde und die entstandenenA culture of FELy.r cells was centrifuged for 5 min; the resulting cake was resuspended in fetal calf serum (Flow Labs) as a slurry. A stock solution of 1.4% chitosan as described above was prepared and mixed with the cell culture solution, the final concentration of chitosan being 1 % (weight / volume) and of cells being about 5 × 10 cells / ml. Intermediate matrices were produced by forcing the chitosan-cell mixture through a droplet-forming device (as described above) and the resulting
flüssigen Mikrokügelchen mit einer 125 mM Phosphatlösung (wie oben beschrieben) behandelt wurden. Die entstandenen Zwischenmatrizes wurden wiederholt mit isotoner PBS gewaschen und in einer Poly-L-Asparaginsäurelösung (mit einem Molekulargewicht von 40.000 Dalton) in einer Konzentration von 6,6 χ 10 g/100ml in.150 mM Natriumchlorid wieder suspendiert. Nach einer Reaktionszeit von 6 min bei Raumtemperatur in der Poly-L-AsparaginsäurelÖsung wurden die entstandenen Kapseln zweimal mit dem Kulturmedium RPMI-1640 (Flow Labs), das 10 I Kalbsfötusserum und Antibiotika enthält, gewaschen. Die Mikrokapseln wurden mit dem Kulturmedium in Gewebekulturflaschen eingebracht und bei 37 0C und einer 5 2-igen CO2-Atmosphäre inkubiert.liquid microspheres were treated with a 125 mM phosphate solution (as described above). The resulting intermediate matrices were washed repeatedly with isotonic PBS and resuspended in a poly-L-aspartic acid solution (with a molecular weight of 40,000 Dalton) in a concentration of 6.6 10 g / 100 ml in 150 mM sodium chloride. After a reaction time of 6 min at room temperature in the poly-L-aspartic acid solution, the resulting capsules were washed twice with the culture medium RPMI-1640 (Flow Labs), which contains 10 l of fetal calf serum and antibiotics. The microcapsules were introduced into tissue culture flasks with the culture medium and incubated at 37 ° C. and a 5 2 CO 2 atmosphere.
Proben der Zellkultur wurden zu verschiedenen Zeiten entnommen und in einem Mikroskop untersucht, wobei festgestellt wurde, daß die Zellen wachsen und sich reproduzieren, was die Lebensfähigkeit der Zellen nach der Einkapselung beweist. Es sollte festgestellt werden, daß die Stufe der Wiederverflüssigung nicht angewendet wurde, da Friend-Zellen sowohl in einer Gelkultur als auch in einer Suspensionskultur wachsen können. Viele Zellarten benötigen jedoch zur Reproduktion ein flüssiges Kulturmedium. Die Lebensfähigkeit der Zelle sollte durch die Wiederauflösung des Kapselinneren nicht beeinträchtigt werden. Die Kapsel stellt eine von äußeren Verunreinigungen freie MikroUmgebung zur Verfügung.Samples of the cell culture were taken at various times and examined in a microscope, whereby found was that the cells grow and reproduce, which increases the viability of the cells after Encapsulation proves. It should be noted that the reliquefaction stage has not been applied, since Friend cells can grow in both gel and suspension cultures. Many types of cells however, require a liquid culture medium for reproduction. The viability of the cell should be reduced by the Redissolution of the interior of the capsule not affected will. The capsule provides a micro-environment free of external contamination.
Für den Fachmann liegen andere Modifikationen- oder Ausführungsformen des beschriebenen Verfahrens und des Produkts innerhalb des Schutzumfangs der Erfindung. Dem-Other modifications or changes will occur to those skilled in the art Embodiments of the described method and the Product within the scope of the invention. To the-
entsprechend fallen andere Ausführungsformen auch unter die Ansprüche.accordingly, other embodiments are also included the requirements.
Claims (30)
dadurch gekennzeichnet,2. The method according to claim 1,
characterized,
gekennzeichnet durch21. capsule,
marked by
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US52839583A | 1983-09-01 | 1983-09-01 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE3432143A1 true DE3432143A1 (en) | 1985-03-21 |
DE3432143C2 DE3432143C2 (en) | 1987-05-14 |
Family
ID=24105521
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE19843432143 Granted DE3432143A1 (en) | 1983-09-01 | 1984-08-31 | METHOD FOR ENCLOSURE A MATERIAL TO BE ENCLOSED |
Country Status (14)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS6075326A (en) |
AU (1) | AU563653B2 (en) |
BE (1) | BE900469A (en) |
CA (1) | CA1245984A (en) |
CH (1) | CH664472A5 (en) |
DE (1) | DE3432143A1 (en) |
DK (1) | DK419184A (en) |
FR (1) | FR2551455B1 (en) |
GB (1) | GB2145992B (en) |
IL (1) | IL72787A (en) |
IT (1) | IT1196742B (en) |
NL (1) | NL8402671A (en) |
NO (1) | NO843481L (en) |
SE (1) | SE8404343L (en) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3590071C2 (en) * | 1984-02-23 | 1988-05-05 | Snow Brand Milk Products Co Ltd | Process for the production of capsules |
DE3941873A1 (en) * | 1989-12-19 | 1991-06-20 | Jakob Dr Bodziony | Hollow fibres coated which cells with inhibit coagulation - for long-term use as implants in arteries and veins to carry sensors |
DE4012079A1 (en) * | 1990-04-14 | 1991-10-24 | Jakob Dr Bodziony | IMPLANTABLE SEMIPERMEABLE EXCHANGE AND DIFFUSION CHAMBER |
Families Citing this family (18)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
NO166836C (en) * | 1985-03-14 | 1991-09-11 | Univ California | PROCEDURE FOR TREATMENT OF AN ORGAN TRANSPLANT. |
GB8705464D0 (en) * | 1987-03-09 | 1987-04-15 | Atomic Energy Authority Uk | Composite material |
JPS6434436A (en) * | 1987-07-28 | 1989-02-03 | Sanyo Chemical Ind Ltd | Gel cellular beads and manufacture thereof |
CA1319632C (en) * | 1988-04-22 | 1993-06-29 | Carol Louise Nolan | Method for microbial immobilization |
US4952618A (en) * | 1988-05-03 | 1990-08-28 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Hydrocolloid/adhesive composition |
US5487390A (en) * | 1990-10-05 | 1996-01-30 | Massachusetts Institute Of Technology | Gas-filled polymeric microbubbles for ultrasound imaging |
US5149543A (en) * | 1990-10-05 | 1992-09-22 | Massachusetts Institute Of Technology | Ionically cross-linked polymeric microcapsules |
US5562099A (en) * | 1990-10-05 | 1996-10-08 | Massachusetts Institute Of Technology | Polymeric microparticles containing agents for imaging |
FR2694894B1 (en) * | 1992-08-20 | 1994-11-10 | Coletica | Use of a transacylation reaction between an esterified polysaccharide and a polyamine or polyhydroxylated substance for the manufacture of microparticles, process and composition. |
FR2703927B1 (en) * | 1993-04-13 | 1995-07-13 | Coletica | Use of a transacylation reaction between an esterified polysaccharide and a polyamine to form in an aqueous medium a membrane at least on the surface of gelled particles. |
DE4312970A1 (en) * | 1993-04-21 | 1994-10-27 | Juergen Dr Schrezenmeir | Microcapsule and process and apparatus for production thereof |
DE4426396A1 (en) * | 1994-07-26 | 1996-02-01 | Ulrich Prof Dr Zimmermann | Process for the preparation of concentrated solutions of microencapsulated cells or of suspended active substances in microencapsulated form |
US5540927A (en) * | 1995-04-12 | 1996-07-30 | Monsanto Company | Microencapsulation process by coacervation |
EP1064087B1 (en) * | 1998-03-19 | 2006-01-25 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Production of nanocapsules and microcapsules by layer-wise polyelectrolyte self-assembly |
US7101575B2 (en) | 1998-03-19 | 2006-09-05 | Max-Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften E.V. | Production of nanocapsules and microcapsules by layer-wise polyelectrolyte self-assembly |
DE102004013637A1 (en) | 2004-03-19 | 2005-10-13 | Capsulution Nanoscience Ag | Process for the preparation of CS particles and microcapsules using porous templates as well as CS particles and microcapsules |
DE102005002483A1 (en) * | 2005-01-18 | 2006-08-03 | Ehrfeld Mikrotechnik Bts Gmbh | Method for encapsulating sensor molecules with a semipermeable membrane |
FR2986165B1 (en) | 2012-01-31 | 2015-07-24 | Capsum | PROCESS FOR PREPARING RIGIDIFIED CAPSULES |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3209045A1 (en) * | 1981-03-13 | 1982-09-30 | Damon Corp., 02194 Needham Heights, Mass. | METHOD FOR SELECTIVELY BREAKING PERMEABLE MEMBRANES |
US4352883A (en) * | 1979-03-28 | 1982-10-05 | Damon Corporation | Encapsulation of biological material |
-
1984
- 1984-08-28 IL IL72787A patent/IL72787A/en unknown
- 1984-08-28 CA CA000461966A patent/CA1245984A/en not_active Expired
- 1984-08-30 CH CH4158/84A patent/CH664472A5/en not_active IP Right Cessation
- 1984-08-30 BE BE0/213566A patent/BE900469A/en not_active IP Right Cessation
- 1984-08-31 NO NO843481A patent/NO843481L/en unknown
- 1984-08-31 GB GB08422052A patent/GB2145992B/en not_active Expired
- 1984-08-31 AU AU32634/84A patent/AU563653B2/en not_active Ceased
- 1984-08-31 JP JP59180831A patent/JPS6075326A/en active Pending
- 1984-08-31 NL NL8402671A patent/NL8402671A/en not_active Application Discontinuation
- 1984-08-31 FR FR8413514A patent/FR2551455B1/en not_active Expired
- 1984-08-31 SE SE8404343A patent/SE8404343L/en not_active Application Discontinuation
- 1984-08-31 DK DK419184A patent/DK419184A/en not_active Application Discontinuation
- 1984-08-31 DE DE19843432143 patent/DE3432143A1/en active Granted
- 1984-09-03 IT IT67874/84A patent/IT1196742B/en active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4352883A (en) * | 1979-03-28 | 1982-10-05 | Damon Corporation | Encapsulation of biological material |
DE3209045A1 (en) * | 1981-03-13 | 1982-09-30 | Damon Corp., 02194 Needham Heights, Mass. | METHOD FOR SELECTIVELY BREAKING PERMEABLE MEMBRANES |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3590071C2 (en) * | 1984-02-23 | 1988-05-05 | Snow Brand Milk Products Co Ltd | Process for the production of capsules |
DE3941873A1 (en) * | 1989-12-19 | 1991-06-20 | Jakob Dr Bodziony | Hollow fibres coated which cells with inhibit coagulation - for long-term use as implants in arteries and veins to carry sensors |
DE4012079A1 (en) * | 1990-04-14 | 1991-10-24 | Jakob Dr Bodziony | IMPLANTABLE SEMIPERMEABLE EXCHANGE AND DIFFUSION CHAMBER |
DE4012079C2 (en) * | 1990-04-14 | 1997-11-06 | Jakob Dr Bodziony | Implantable exchange and diffusion chamber |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
IT8467874A1 (en) | 1986-03-03 |
DK419184A (en) | 1985-03-02 |
IT1196742B (en) | 1988-11-25 |
SE8404343D0 (en) | 1984-08-31 |
CA1245984A (en) | 1988-12-06 |
NL8402671A (en) | 1985-04-01 |
BE900469A (en) | 1984-12-17 |
GB2145992A (en) | 1985-04-11 |
DK419184D0 (en) | 1984-08-31 |
IL72787A0 (en) | 1984-11-30 |
GB2145992B (en) | 1987-02-18 |
AU3263484A (en) | 1985-03-07 |
SE8404343L (en) | 1985-03-02 |
CH664472A5 (en) | 1988-03-15 |
IT8467874A0 (en) | 1984-09-03 |
NO843481L (en) | 1985-03-04 |
GB8422052D0 (en) | 1984-10-03 |
FR2551455B1 (en) | 1989-09-15 |
JPS6075326A (en) | 1985-04-27 |
FR2551455A1 (en) | 1985-03-08 |
AU563653B2 (en) | 1987-07-16 |
IL72787A (en) | 1987-12-31 |
DE3432143C2 (en) | 1987-05-14 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DE3432143A1 (en) | METHOD FOR ENCLOSURE A MATERIAL TO BE ENCLOSED | |
EP1064087B1 (en) | Production of nanocapsules and microcapsules by layer-wise polyelectrolyte self-assembly | |
DE3012233C2 (en) | ||
DE3209127C2 (en) | ||
DE69531821T2 (en) | MULTILAYER ALGINATE COATINGS OF BIOLOGICAL TISSUE FOR TRANSPLANTATION | |
DE3504724A1 (en) | METHOD FOR ENCLOSURE A MATERIAL TO BE ENCLOSED | |
DE3209045A1 (en) | METHOD FOR SELECTIVELY BREAKING PERMEABLE MEMBRANES | |
EP1025869B1 (en) | Process for the manufacture of stable alginate material | |
DE3209098C2 (en) | ||
DE10001172A1 (en) | Templating solid particles with polymer multilayers | |
DE3414083C2 (en) | ||
DE69826119T2 (en) | HETEROPOLYSACCHARIDE CONJUGATES, HALVINTERPENETRIEREN POLYSACCHARIDGELE AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF | |
DE19902724A1 (en) | Microcapsules, e.g. useful as filtration and chromatography media, comprise intact macroporous pollen exine or sporoderm | |
DE3590071C2 (en) | Process for the production of capsules | |
EP0472772A1 (en) | Process for the preparation of vital drug-laden human erythrocytes | |
DE3509210C2 (en) | ||
EP1811978B1 (en) | Production of double- or multi-layered microcapsules | |
Vigh et al. | Ultrastruktur der Liquorkontaktneurone des Rückenmarkes von Reptilien | |
DD294729A5 (en) | PROCESS FOR THE PRODUCTION OF IMMOBILISATES WITH BIOLOGICALLY ACTIVE, MACROMOLECULAR COMPOUNDS | |
EP1090984B1 (en) | Process for the production, the transport and the elimination of biochemical products with biological active cells | |
EP0917492B1 (en) | Immobilizate and method for the immobilization of useful material | |
DE102022125807A1 (en) | Process for producing an anthropogenic target substance | |
DE3534983A1 (en) | COMPLEX IMMOBILIZED BIOCATALYSTS AND THEIR PRODUCTION AND USE | |
AT385428B (en) | Membrane which consists of protein-containing molecules or protein molecules which adjoin one another in crystalline or paracrystalline form and has defined pores, and method for changing the clear width of the pores in this membrane, and use thereof | |
DE102004009051A1 (en) | Microcapsule immobilizing species for use in chemistry, food- or pharmaceutical technologies is stable when stored in concentrated medium and is ruptured on slight stressing following dilution |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
OP8 | Request for examination as to paragraph 44 patent law | ||
D2 | Grant after examination | ||
8364 | No opposition during term of opposition | ||
8339 | Ceased/non-payment of the annual fee |