CN1288157A - 用于测定LogP值的高效率HPLC方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了计算有机化合物Log P值的方法。该方法可以鉴别库中具有期望Log P值的化合物。该方法可以用于减少在给定的组合或引导产生的库中需要进一步鉴别和/或检测的化合物的数量。优选在检测的化合物进行纯化的同时获得Log P值。Log P值优选与HPLC柱中的保留时间相关,如保留时间等于Log P值。

Description

用于测定Log P值的高效率HPLC方法
本发明总的来说涉及化合物库的Log P值的测定，例如，组合和/或引导产生(Lead generation)库。
对于许多药物和杀虫剂来说，在它们的生理活性和疏水性之间存在一定关系。用于测定疏水性的经典方法为测定化合物在水和正辛醇的分配对数。当在色谱保留数据和正辛醇/水分配系数的对数(Log P)之间可以建立关系时，化合物的疏水性可以通过色谱测定，而不是通过振摇烧瓶的方法。正辛醇/水分配系统不一定是理想的方法。基于HPLC方法的可靠性，源于色谱的测定可能更可靠。
应用色谱方法同振摇烧瓶方法相比具有许多优越性。例如，色谱方法更快，并更适合含有杂质的化合物。因不需要定量测定，该方法可以应用于易挥发的化合物。
已经开发了多种用于测定Log P值的HPLC方法。与应用HPLC方法相关的一个限制是当评价电离的化合物时，必须要特别小心。通常，Log P值的的计算需要对化合物解离因子的校正(CD)。
一个应用HPLC测定Log P值的方法涉及涂布具有水饱和正辛醇的硅烷化硅藻土载体，并应用正辛醇饱和缓冲液作为洗脱剂(Mirrlees等，医学化学杂质(J.Med.Chem.)，19：615(1976))通过改变柱长和流速，可以获得范围在-0.3和3.7之间的Log P值。在C18柱中，还确定了LogP值与保留体积的对数值之间的相关性。已知Log P值与HPLC之间相关的多种其它方法，每个方法都有一定的优点和缺点(化学分析，91：234-278(11章)，Wiley和Sons，纽约(1987))。
从HPLC测定(log k’)获得的保留参数可以用于获得有关化合物疏水性的信息。用疏水固定相和用水作为流动相的保留数据可以直接应用，尽管它通常导致过长的保留时间。在某个洗脱组分下测得的等分数据(对于给定的洗脱组分X，典型为log k’x)，可以用于计算Log P值。当应用含有可与水混合的有机溶剂(如甲醇、乙腈和丙酮)的水溶液，色谱数据可以外推至流动相中有机溶剂为0％的点，其可以使HPLC比单独使用水时流速快，仍可以获得合理可靠的结果。
但是，该方法有一定限制，因为只有少量可与水混溶的有机溶剂可存在于水中。如果有机溶剂存在量过多，浓度与log k’w之间的线性关系可能就不存在。几个发明者已致力于应用等分log k’x值，而不是log k’w值。
用于测定Log P值的HPLC方法的进一步限制在于他们通常依赖于容量因子与Log P值之间的相关性，该相关性通常只是对相关化合物接近，对含有不同官能团的化合物较差。
尽管具有与应用过多有机溶剂相关的限制和与在反相柱上分析高极性电离化合物相关的问题，基于Log P值与log k’之间的线性关系，HPLC方法仍可以用于测定大量有机化合物。不论如何，提供能克服这些方法限制的其它HPLC方法，都是有利的。并且，提供用于测定化合物库中疏水性的方法是很有利的。本发明提供了这类方法。
本发明公开了用于高效率化合物库的Log P值测定的方法和装置，例如，组合和/或引导产生库。该方法涉及获得多种要评价的化合物，应用HPLC方法测定化合物的Log P值。在一个优选的实施方案中，同时测定化合物的纯度和Log P值。在另一个优选的实施方案中，对化合物进行Log P值测定和用于检测其生物活性的生物检测。对具有所需生物活性和Log P值的化合物可以进行进一步检测，与具有所需Log P值、但活性不理想的化合物和具有所需活性、但Log P值不理想的化合物分别进行评价。
该方法的优点在于它可以进行不仅具有所需的生物活性、而且具有预定应用所需的疏水性/亲水性的化合物的迅速测定。可以筛选组合库中大量的化合物，迅速鉴别用于特定目的的化合物。
在另一个优选的实施方案中，该方法允许基于保留时间计算Log P值的测定，而不是等分方法(其不使用梯度)。
图1为一系列标准物Log P值对保留时间的绘图。
图2为一系列标准物Log P值对容量因子的绘图。
图3为一系列标准物Log P值对Log K的绘图。
本发明公开了用于化合物库中测定Log P值以及任选的纯度的方法和装置。该方法可以广泛应用于组合库和引导产生库，其可以任选进行鉴别和/或效果的评价，例如，应用于生物检测。
在一个实施方案中，该方法使人们将化合物的Log P值与化合物在HPLC柱中的保留时间相对应，优选同时测定化合物的纯度。在该方法中，可以调节具体柱的溶剂梯度和流速，以及柱填充物，使一系列标准物的保留时间等于振摇烧瓶方法测定的Log P值。然后，一旦系统建立，使保留时间近似等于Log P值后，就可以对化合物进行评价。在该实施方案中，优选使用短柱(小于或等于5×50mm柱)，优选使用具有相对小粒径(5微米或更小)的柱填充物(吸附剂)，因为可以忽略柱的空体积。
在一个优选的实施方案中，有关化合物纯度、同一性、Log P和生物活性可以储存在数据库中，可以从化合物库中迅速鉴别出具有所需LogP值和生物活性的化合物。
在本文中，“HPLC相容的检测器”是指适合用于HPLC系统的检测器，其可以在洗脱出化合物峰后提供可检测的信号。例如，当一种化合物从组分中洗脱出来，可以产生信号的检测器为HPLC相容的检测器。其中组分的吸收度变化较宽，可能有必要使用多个检测器。由于其不能检测出非需要的峰，能够检测出所需组分的检测器不是“不相容”的检测器。
HPLC装置
顶替色谱(一个HPLC的例子)基于样品在固定相(SP)和流动相(MP)之间平衡的原则，改变SP的方向。样品的单个组分像火车一样互相替换，与SP亲合更强的替换剂将组分的火车推出柱。HPLC色谱是顶替色谱中最熟知的例子。
一个HPLC装置典型包括至少下列部分：一个柱，填充有适合的固定相，流动相，在压力下使流动相通过柱的泵，和一个用于检测从柱中洗脱出的化合物存在的检测器。该装置可以任选包括用于提供梯度洗脱的装置，其中溶剂系统在纯化过程中变化。
用于进行HPLC分离的常规方法和装置是本领域公知技术，例如，如下列文献所描述：色谱杂志(J.Chromatography)，192：222-227(1980)，液相色谱杂志(J.Liquid Chromatography)，4：661-680(1981)，和色谱杂志(J.Chromatography)，249：193-198(1982)。
适合的固定相为能从其中洗脱出所需化合的那些物质。优选的柱为反相柱，其可以为天然的(具有不同长度烷基链的硅胶)或合成的交联聚合物(由苯乙烯和二乙烯基苯组成)。固定相粒径的大小范围在几微米至几百微米之间。最优选的固定相为C18柱。
在一些实施方案中，因为许多化合物在碱性介质中的弱稳定性，如铵盐，流动相的pH值必须为弱酸性的，可以通过酸的浓度或通过形成适当的缓冲液进行调节。
适合的检测装置包括质谱、蒸发光散射(ELSD)和紫外(UV)检测器。本文描述的方法可以单独使用或组合使用这些检测器。
                        Log P方法
在一个实施方案中，该方法涉及进行下列步骤：
a)选择一个化合物库进行评价，
b)应用HPLC方法，测定化合物的Log P值，任选同时测定化合物的纯度，
c)任选化学鉴别化合物，和
d)任选对化合物进行检测，测定它们的生物活性。
在一个优选的实施方案中，从化合物在HPLC柱中的保留时间测定Log P值，应用下列实施例1中描述的优选方法或其它方法，其中，例如应用不同的溶剂、注射体积、流速、柱体积和/或柱填充物，提供了保留时间和Log P值之间的直接关系。该方法优选涉及梯度洗脱，其中该梯度用于使具有某一疏水性的化合物在某一时间间隔内洗脱出来。
应用该方法，保留时间本身可以等于Log P，或者Log P为保留时间与线的斜率相乘，其中该线为一组化合物已知的Log P值与这些化合物应用给定的HPLC方法测定的保留时间之间的线性相关线。应用适当的HPLC方法，如本文实施例1中描述的方法，可获得保留时间和Log P值之间的线性关系。也可以应用实施例1中未描述的、但可以提供保留时间和Log P之间线性关系的其它方法，其也在本发明的范围内。或者，其它应用HPLC测定Log P值的方法，包括本领域公知的等分HPLC方法，也可以使用。
通过测定化合物的Log P值，优选同时测定它们的纯度，可以排除不具有所需Log P值的化合物，可以鉴定只具有所需Log P值(疏水性)的化合物，评价其生物活性。这可以使评价化合物库的速度更快。
可以任选进行下列步骤。化合物的信息(即紫外吸收和MS信息)可以储存在相关的数据库中，数据库中还优选包括关于化合物的其它信息(即合成条件、生物检测信息、产量等)。可以进一步鉴别化合物，例如，通过1H NMR。为了更快地评价化合物的纯度，HPLC可以包括两个或更多的柱，其中的一个用于测定化合物的Log P值，而另一个清洗和再生。该步骤消除了色谱平衡等待时间。
            可以应用该方法评价的化合物的类型
应用本文描述的方法，可以测定能从HPLC柱洗脱的任何有机化合物的Log P值和纯度。该化合物优选为一个化合物库的一部分，更优选为引导产生的或组合化合物库。
术语“库”指至少3个，优选为102-109，更优选为102-104化合物。优选这些化合物是在一个易于合成它们的单一溶液中或反应混合物中制备的多种化合物。库中的每个化合物可以是分离的，或任选已被鉴定。
一般情况下，化合物具有一个核心结构，其中在至少一个位置，优选两个或更多的位置上被多种不同的官能团进行修饰，以产生一个库，例如，组合的或引导优化(lead optimizaton)的化合物库。
典型的核心结构为直链的、支链的或环状有机化合物，其包括至少3个碳原子，并且至少1个，优选至少2个部位能够进行反应以改变结构，通常通过将其它分子加入到反应部位来进行。
杀虫剂族的例子包括1-芳基吡唑、吡咯、吡咯烷酮和烟酸衍生物。然而，可以结合到适当结合部位的配位体化合物可以为，例如，甾类、激素、肽、蛋白质、低聚核苷酸、寡核糖核苷酸、酶等。
适合的核心结构包括，但不限于肽、蛋白质、低聚核苷酸、寡核糖核苷酸、低聚糖、生物碱、喹啉、异喹啉、苯并咪唑、苯并噻唑、嘌呤、嘧啶、四氢噻唑、咪唑并吡嗪酮、呃唑并吡啶、吡咯、吡咯烷、咪唑酮、guinolone、氨基酸、大环内酯物、penems、糖类、叶黄素、苯丙噻二嗪、anthracycline、二苯并环庚二烯、肌糖、卟啉、咕啉、和碳骨架存在的几何体(例如，十二面体)。核心结构可以来源于天然存在的化合物，或者可以包括非天然修饰物(即，非天然存在的氨基酸和核苷。
适合的核心结构修饰物包括：
1)氨基酸衍生物，其中包括，例如，天然的和合成的氨基酸残基，其中包括所有天然存在的α氨基酸，具有衍生物的种类，天然存在的侧链的变异体或类似物；N-取代的甘氨酸残基；已知的在功能上类似氨基酸残基的天然的和合成的种类，如抑制素、苯丁抑制素等。
2)核苷酸衍生物，其中包括天然的和合成的核苷酸，如腺苷、胸腺嘧啶，胍，尿苷，胞核嘧啶，它们的衍生物和嘌呤环的变异体和类似物，糖环，磷酸键和它们中的一些或全部的组合。核苷酸探针(2-25个核苷酸之间)和低聚核苷酸(超过25个核苷酸)包括所有各种可能的结构修饰；天然存在的核苷酸的同型和异型合成的排列和组合；含有合成的嘌呤或嘧啶类的衍生物和变异体，或它们的类似物；各种糖环类似物；多种可选的骨架类似物，包括但不限于磷酸二酯、硫逐磷酸酯、二硫逐磷酸酯、氨基磷酸酯、烷基磷酸三酯、氨基磺酸盐、3’-硫醛乙缩醛(thioformacetal)，亚甲基(亚氨甲基)，3-N-氨基甲酸盐，吗啉代氨基甲酸盐和肽核酸类似物。
3)碳水化合物的衍生物，其包括天然生理活性的碳水化合物；相关化合物，如葡萄糖、半乳糖、唾液酸、β-D-葡糖胺和nojorimycin，其均为葡萄糖苷酶抑制剂；伪糖，如5a-carba-2-D-比喃半乳糖，已知其抑制肺炎克雷白杆菌的生长(n=1)；合成的碳水化合物残基和它们的衍生物(n=1)，并且它们的所有的复合寡聚排列均发现于自然界中，包括高甘露糖低聚糖，已知的抗生素链霉素(n＞1)。
4)天然存在的或合成有机结构基序，术语“基序”被定义为具有或含有生物活性的特定结构的有机分子，如对酶活性部位具有互补结构的分子。该术语包括任何已知的药物化合物的基本结构，包括药效基团或它们的代谢物。该基本结构包括β-内酰胺，如青霉素，已知其抑制细菌细胞壁生物合成；二苯并氮卓，已知其与CNS受体结合，用作抗抑郁药；多聚乙酰大环内酯物，已知其与细菌核糖体酶结合。这些结构基序已知具有特异性的所需的与配体受体结合的性能。
5)报告元件，如能够光放大的天然或合成的染料或残基，其具有可反应基团，可以在合成中结合到氨磺酰亚胺结构或反应程式中，可以通过这些基团附着，而干扰或影响基团的指示功能。优选的反应基团为氨，硫，羟基，羧酸，羧酸酯，特别是甲基酯，酰基氯，异氰酸盐，烷基卤化物，芳基卤化物，和环氧乙烷基团。
6)含有可聚合基团的有机部分，如双键，或能够进行聚合或共聚的其它官能团。适合的基团包括乙烯基，环氧乙烷基，羧酸，酰基氯，酯，酰胺，二氢唑酮，内酯和内酰胺，还可以使用那些被定义为R和R’的其它有机部分。
7)大分子成分，如通过上面归纳的各种反应基团可以附着到氨磺酰亚胺结构上的大分子表面或结构，其结合方式使这种相连的种类与配体-受体分子的接合不产生负面影响，并且该连接的功能团的相互作用活性由该大分子确定或限制。大分子成分的例子包括多孔的和非多孔的无机成分，例如，二氧化硅，氧化铝，氧化锆，二氧化钛等，其通常用于不同方面，如普通或反相色谱分离，水纯化，用于着色的颜料等；多孔的和非多孔的有机大分子成分，包括合成成分，如苯乙烯丁二烯苯小珠，各种甲基丙烯酸酯小珠，PVA小珠等，其通常用于蛋白质纯化，水软化，和多种其它的应用；天然成分如天然的和功能化的纤维素，如，例如，琼脂糖和壳质，由尼龙制成的薄片和中空纤维膜，聚醚砜，或任何上面提到的材料。这些大分子的分子量范围可以直到大约2000道尔顿。
适合的化学修饰物还包括化学键合到适当的有机部分，放射性部分，氢原子，含有适当的亲电子基团的有机部分，如醛，酯，烷基卤化物，酮，腈，环氧化物等；适合的亲核基团，如羟基，氨，羧酸盐，酰胺，负碳离子，尿素等；或其中一个下面定义的其它结构成分。另外，化学修饰物可以以环、双环或三环系统的形式；或连接到上述分子式定义的化合物重复单元末端的结构；或可以分别连接到其它部分上。
这种修饰可以相同或不同，每个可以含有一个或更多的碳、氮、硫、氧原子，任何无机元素，或它们的组合。例如，核心结构可以用氰基、氮、卤素、氧、羟基、烷氧基、硫、直链或支链烷基、碳环芳基，和它们的取代或杂环衍生物。修饰可以是在不同的相邻的分子核中，对于它们附着的碳原子具有选择的立体化学排列。
化合物可以逻辑化的方式在多管排列(array)或多孔板，以化学化合物排列的形式合成。优选地，化合物都具有中心核结构，具有各种修饰，其可以进行结构-活性关系的鉴别，用其确定用于特定应用的最佳化合物。
排列的安排方式应可加快合成、纯化和评价，以从测试获得最大的信息内容，并便于迅速评价这些数据。
排列可以从逻辑排列的化合物的亚排列来建立。可以制备这样一种亚排列，这种亚排列包括结构相关的单个化学化合物的可空间寻址的组，这些化合物具有共同的结构和可变的修饰。当结构中多个位置被修饰时，亚排列特别有用，在给定亚排列中的任何两个化合物之间的变化可以包括，例如，结构中0个或1个改变。
这些亚排列和排列可以被组织形成更高次序的排列，其包括多组排列，可以被作为更高次序的排列评价，以提供关于感兴趣的共同核结构的最佳结构特征的信息。
这种亚排列的安排方式应可通过直接比较化合物自动产生有关已知的片段在所期望的应用中所具有的效果的信息，以及对物理和反应性质的影响的信息。按照简单群组理论(simple set theory)，对于任何数量的独立可变结构多样性元素(independently variable structural diversityelements)n，存在n个逻辑高阶排列，这样通过从适当排列的亚排列中相关地址的测试数据的比较，可以以类似的方式获得每个n结构多样性元素变化的效果的关系信息。
通过筛选核分子的所有可能合成变化，最佳候选者的选择与选择化合物的“合理”基础相比，更应该说是数据收集方法的函数。可以迅速优化期望的物理和化学性质，即结合亲和性与生物活性，直接在特定的排列或亚排列内与结构的改变相关。
因为已知每个化合物在多管架的空间地址，可以测试排列以产生完全的相关结构信息，因此一个正结果提供：(1)关于在任何给定空间地址的化合物的信息；(2)在一组系统结构同种物上同时并列这一信息；(3)在存在正结果的负结果中提取相关结构信息的能力。
纯化优选通过计算机控制进行，其中多管排列中每个管或多孔盘中每个孔的位置储存在计算机中，要合成的化合物的身份被储存在计算机中的“记忆图”中，或储存在将化合物的数据与管或孔的位置相关的其它的装置中。或者，可以人工进行纯化，优选在多管架或多孔盘内进行，信息储存在计算机中。可以纯化和/或鉴别管中的化合物。
参照下列非限定性的实施例，可以进一步理解本发明。实施例1：分析方法
极性范围从高到低、已知Log P值范围从-1.05至5.77的16个化合物的溶液应用下表1描述的条件进行评价。
仪器使用Gilson HPLC系统，其具有两个Gilson 306型泵(10SC泵压头)，Gilson170二极管排列紫外检测器(254nm)，Gilson215液体处理器作为注射器。蒸发光散射检测器(Richard Scientific)和平台式LC质谱(Micromass)用作检测器。
流动相为甲醇/水的双向梯度。固定相为用5纳米ODS-AQ填充的4.6×50nm柱。注射体积为5μl。调节流动相的梯度，以使Log P接近等于HPLC柱中的保留时间。溶剂和流速总结在下表1中。
                      表1
时间 流速(mL/min) 溶剂A* 溶剂B**
0 1.5 72 28
1 1.5 42 28
2 1.5 10 90
4 1.5 2 98
6 1.5 0 100
6.1 2.1 0 100
8.0 2.1 72 28
8.1 1.5 72 28
*溶剂A为98.5％/1.5％(v/v)水/乙腈**溶剂B为100％甲醇6.1分钟后设定柱进行再平衡。
HPLC测试每个样品进行3次，以说明方法的重现性。保留时间，平均保留时间，标准差(STD)和与振摇烧瓶方法Log P值的比较(lit.LogP)列于下表2中。
                      表2
化合物(标准#)     RT(第一次)     RT(第二次)     RT(第三次)    平均   标准差  lit.LogP
尿嘧啶(1)     0.29  0.32  0.29     0.29     0.015  -1.07
苯酰胺(2)     0.54  0.51  0.53     0.53     0.013  0.64
N-甲基苯酰胺(3)     0.63  0.63  0.64     0.64     0.006  0.86
苯甲基醇(4)     0.93  0.95  0.94     0.94     0.008  1.1
苯(5)     1.87  1.85  1.85     1.85     0.010  1.58
乙酰苯基酮(6)     1.9  1.88  1.89     1.89     0.008  2.13
溴苯(7)     3.36  3.36  3.38     3.38     0.012  2.99
对氯甲苯(8)     3.68  3.68  3.68     3.68     0.000  3.33
二乙基对硫磷(9)     3.77  3.78  3.79     3.79     0.010  3.81
联苯(10)     3.98  3.99  4     4.0     0.010  4.09
2,6-二甲基萘(11)     4.5  4.49  4.49     4.49     0.005  4.31
蒽(12)     4.39  4.41  4.4     4.40     0.008  4.45
苯基硫化物(13)     4.2  4.28  4.26     4.26     0.035  4.45
氟乐灵(14)     4.8  4.81  4.81     4.81     0.005  5.34
甲氧氯(15)     4.48  4.55  4.54     4.54     0.032  4.68
DDE(16)     5.5  5.51  5.5     5.50     0.005  5.77
如表2所示，该方法具有重现性，当保留时间对Log P值作图时，线性相关，如图1所示。直线的斜率为1.0088，y轴截距为0.0268。
保留时间(X)，振摇烧瓶Log P(Y)，上图的斜率和截距用于计算这些标准物的Log P。结果如下表3所示，表明保留时间乘斜率，再加上截距，得到的Log P值近似接近于文献值，除了尿嘧啶，其为高极性化合物。已知该化合物是高极性的。
                          表3
新方法RT(min)(标准#)   计算Log PY=1.009X+0.029 文献Log P 等分LogP 预测Log P
 0.29(1)     0.32     -1.07     -1.05
 0.53(2)     0.56     0.64     0.41     0.66
 0.64(3)     0.68     0.86     0.96     0.86
 0.94(4)     0.98     1.1     0.96     1.1
 1.85(5)     1.90     1.58     1.99     1.58
 1.89(6)     1.94     2.13     2.54     2.64
 3.38(7)     3.44     2.99     3.23     3
 3.68(8)     3.74     3.33     3.57     3.35
 3.79(9)     3.85     3.81     3.39     3.2
 4.00(10)     4.07     4.09     3.8     4.03
 4.49(11)     4.56     4.31     4.49     4.31
 4.40(12)     4.47     4.45     4.46     4.49
 4.26(13)     4.33     4.45     4.31     4.48
 4.81(14)     4.88     5.34     5     5.02
 4.54(15)     4.61     4.68     4.26     4.45
 5.50(16)     5.58     5.77     6.28     5.73
Log P对这些化合物的容量因子K(K=t-t0/t0)作图，得到线性曲线，如图2所示。当Log P对这些标准物容量因子K的对数值作图，得到下列指数曲线，如图3所示。
应用该指数方程和这些标准物的HPLC保留时间，计算出Log P和Log K，与保留时间和文献Log P值相比较，结果总结在下表4中。
                          表4
    Log K(标准#) 通过斜率计算的Log P     RT 文献LogP
    -0.12(2)     0.58     0.53     0.64
    0.05(3)     0.75     0.64     0.86
    0.33(4)     1.18     0.94     1.1
    0.71(5)     2.18     1.85     1.58
    0.72(6)     2.22     1.89     2.13
    1.01(7)     3.50     3.38     2.99
    1.05(8)     3.74     3.68     3.33
    1.07(9)     3.82     3.79     3.81
    1.09(10)     3.98     4.00     4.09
    1.15(11)     4.34     4.49     4.31
    1.14(12)     4.27     4.40     4.45
    1.12(13)     4.17     4.26     4.45
    1.18(14)     4.57     4.81     5.34
    1.15(15)     4.37     4.54     4.68
    1,24(16)     5.04     5.50     5.77
计算如下：
Y=0.6972e1.5966X
R2=0.9673
如表4所示，在应用指数方程通过保留时间计算的Log P值与从振摇烧瓶方法得到的文献Log P值之间，存在合理的相关性。
ODS-AQ4.6×50nm柱(由YMC制造的C18反相柱)的空体积(V0)和空时间(t0)相当小。
下列方程可以用于计算V0和t0。
V0=0.65×3.14(d/2)2L，其中d为柱内径(ID)(cm)，L为柱长(mm)。
空时间(t0)=V0／F，其中F为流速(mL/min)。
按照上面方程计算的V0和t0，柱的空体积和空时间分别为大约0.5mL和0.35min。实际上，该数值通常大约为0.38mL和0.25min。
本领域技术人员应用常规的实验，可以发现或确定许多与本文描述的本发明具体实施方案相等价的方法。这些等价的方法包括在下面权利要求的范围内。

Claims (11)

1．一种用于测定化合物库中Log P值的方法，包括：
a)选择一个化合物库进行评价；
b)通过HPLC测定化合物的Log P值。
2．按照权利要求1的方法，其中数据储存在数据库中。
3．按照权利要求2的方法，进一步包括鉴别化合物。
4．按照权利要求3的方法，其中只鉴别那些具有期望Log P值的化合物。
5．按照权利要求2的方法，进一步包括对化合物进行生物检测。
6．按照权利要求5的方法，其中只对那些具有期望Log P值的化合物进行生物检测。
7．按照权利要求1的方法，其中用于测定Log P值的方法涉及根据化合物在HPLC柱中的保留时间计算Log P。
8．一种用于计算一种或多种化合物的Log P值的方法，包括：
a)确定一组适当的HPLC条件，使Log P值基本上等于HPLC柱中的保留时间，和
b)通过将化合物从HPLC柱中洗脱出来，测定一种或多种化合物的Log P值。
9．按照权利要求8的方法，其中一种或多种化合物的纯化和Log P值的测定是同时进行的。
10．按照权利要求8的方法，其中要分析的化合物存在于组合或引导产生库中。
11．按照权利要求8的方法，其中通过一种或多种选自UV、MS和ELSD的方法进行检测和/或鉴别。
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